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技術(shù)文章

液相色譜儀使用中常見故障及解決方法

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  1 液相色譜儀系統(tǒng)
  液相色譜儀主要由貯液瓶調解製度、泵、進樣器功能、柱子應用的因素之一、柱溫箱、檢測器預期、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成敢於監督。對于整個系統(tǒng)而言,柱子結構、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位重要的作用。
  2 常見問題及解決方法
  液相作為一種高精密儀器,如果在使用過程中不按照正確操作的話,就容易導(dǎo)致一些問題穩中求進。其中zui常見的就是柱壓問題防控、漂移問題、峰型異常問題適應性。
  2.1 柱壓問題 柱壓問題是使用液相色譜過程中需要密切注意的地方堅實基礎,柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效重要作用、分離效果及保留時間等密切相關(guān)等地。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI(3.3 Bar)之間(在使用梯度洗脫時,柱壓平穩(wěn)緩慢的變化是允許的)尤為突出。壓力過高規定、過低都屬于柱壓問題。
  2.1.1 壓力過高 這是液相在使用中zui常見的問題空間載體,指的是壓力突然升高高質量,一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時重要組成部分,我們應(yīng)該分段進行檢查流程。
  (1).首先斷開真空泵的入口處,此時PEEK管里充滿液體勃勃生機,使PEEK管低于溶劑瓶深刻變革,看液體是否自由滴下,如果液體不滴或緩慢滴下和諧共生,則是溶劑過濾頭堵塞質生產力。處理方法:用30%的硝酸浸泡半個小時,在用超純水沖洗干凈技術交流。如果液體自由滴下先進的解決方案,溶劑過濾頭正常,在檢查創造更多;
  (2).打開Purge閥宣講活動,使流動相不經(jīng)過柱子,如果壓力沒有明顯下降自主研發,則是過濾白頭堵塞確定性。處理方法:將過濾白頭取出更加廣闊,用10%的異丙醇超聲半個小時損耗。如果壓力降至100PSI (6.7 Bar)以下,過濾白頭正常非常完善,在檢查性能穩定;
  (3).把色譜柱出口端取下,如果壓力不下降作用,則是柱子堵塞情況正常。處理方法:如果是緩沖鹽堵塞行業分類,則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質(zhì)導(dǎo)致堵塞提高鍛煉,則要用比現(xiàn)在流動相更強的流動相沖至壓力正常發展邏輯。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降,則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上有所提升,用流動相沖洗柱子聽得進。這時,如果柱壓仍不下降先進水平,只有換柱子入口篩板便利性,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降重要平臺,所以盡量少用深刻認識。
  2.1.1 壓力過低 壓力過低的現(xiàn)象一般是由于系統(tǒng)泄漏,處理方法:尋找各個接口處應用提升,特別是色譜柱兩端的接口深入,把泄漏的地方旋緊即可。當(dāng)然還有一個原因就是泵里進了空氣前沿技術,但此時表現(xiàn)的往往是壓力不穩(wěn)全方位,忽高忽低,更嚴(yán)重一點會導(dǎo)致泵無法吸上液體影響力範圍。處理方法:打開Purge閥大局,用3~5ml/min的流速沖洗,如果不行邁出了重要的一步,則要用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出有序推進。
  2.2.漂移問題 主要包括基線漂移和保留時間漂移。
  2.2.1基線漂移     一般說來需求,機器剛起動時堅定不移,基線容易漂移,大概要半個小時的平衡時間更讓我明白了,如果你用了緩沖溶液或緩沖鹽迎難而上,還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長,但如果你在實驗過程中發(fā)現(xiàn)基線漂移探索,則你要考慮下面的原因:
  1堅持先行、柱溫波動。解決方法:控制好柱子和流動相的溫度滿意度,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱情況較常見。
  2、流通池被污染或有氣體。 解決方法:用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池(斷開柱子)體製。如有需要構建,可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。
  3服務延伸、紫外燈能量不足共創輝煌。解決方法:更換新的紫外燈
  4、流動相污染進一步、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成精準調控。解決方法:檢查流動相的組成,使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑應用的因素之一。
  5解決、樣品中有強保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線開展試點。解決方法:使用保護柱攜手共進,如有必要,在進樣之間推進一步。在分析過程中經過,定期用強溶劑沖洗柱子。
  6力度、檢測器沒有設(shè)定在zui大吸收波長處明確了方向。解決方法:將波長調(diào)整至zui大吸收波長處
  7、流動相的PH值沒有調(diào)節(jié)好勇探新路。解決方法:加適量的酸或堿調(diào)至*PH值
  2.2.2保留時間漂移     保留時間重現(xiàn)是液相性能好壞的一個重要標(biāo)志單產提升,同一種東西,兩次的保留時間相差不要超過15s試驗,超過了半分鐘可看做保留時間漂移勞動精神,就無法進行定性,你要考慮以下原因:
  1製度保障、溫控不當(dāng)預下達。解決方法:調(diào)好柱溫,檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱統籌推進。
  2方案、流動相比例變化。解決方法:檢查四元泵的比例閥是否有故障
  3了解情況、色譜柱沒有平衡深入。解決方法:在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱
  4、流速變化特點。解決方法:重新設(shè)定流速
  5深刻變革、泵中有氣泡。解決方法:和諧共生、從泵中除去氣泡
  2.3 峰型異常問題 峰型問題是液相的主要問題質生產力,在做液相過程中,我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型技術交流,對于各種各樣的異常峰先進的解決方案,要區(qū)別對待,從主要問題出發(fā)創造更多,一個一個加以解決宣講活動。
  1、色譜圖中未出峰大力發展。解決方法:系統(tǒng)未進樣或樣品分解豐富內涵;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設(shè)置不正確產能提升;針對以上情況成因作相應(yīng)調(diào)整即可適應性。
  2、一個峰或幾個峰是負(fù)峰通過活化。解決方法:流動相吸收本底高落地生根;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相健康發展。
  3有效保障、所有峰均為負(fù)峰。解決方法:信號電纜接反或檢測器輸出極性設(shè)置顛倒長效機製;光學(xué)裝置尚未達到平衡講實踐。
  4、所有峰均為寬峰奮戰不懈。解決方法:系統(tǒng)未達到平衡為產業發展;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確有所增加;色譜柱或保護柱被污染或柱效降低各項要求;溫度變化造成的影響。 越來越重要的位置、
  5新技術、所出峰比預(yù)想的小。解決方法:樣品黏度過大順滑地配合;進樣品故障或進樣體積誤差深入;檢測器設(shè)置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測池污染前沿技術;檢測器燈出現(xiàn)問題基礎。
  6性能、出現(xiàn)雙峰或肩峰。解決方法:進樣量過大對外開放;樣品濃度過高技術創新;保護柱或色譜柱柱頭堵塞;保護拄或色譜柱污染或失效資料;柱塌陷或形成短通道帶來全新智能。
  7、前伸峰新產品。解決方法:進樣量或樣品濃度高去完善;溶解樣品的溶劑較流動相極性強;保護柱或色譜柱污染或失效長遠所需。
  8求索、拖尾峰。解決方法:柱超載規模,降低樣品量結構;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾優化上下,對樣品進行清潔過濾能力建設;調(diào)整流動相;硅羥基作用生產體系,加入三乙胺服務,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效能力和水平,更換燒結(jié)不銹鋼覆蓋;加在線過濾器,對樣品進行過濾研究;死體積或柱外體積過大高效,將連接點降至zui低;盡可能使用內(nèi)徑較細的連接管提高;柱效下降機構,更換柱子;采用保護柱交流,對柱子進行再生基礎。
  9、出現(xiàn)平頭峰還不大。解決方法:檢測器設(shè)置不正確高產;進樣體積太大或樣品濃度太高。
  10發揮作用、出現(xiàn)鬼峰良好。解決方法:進樣閥殘余峰逐步顯現,在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物顯著,改進樣品的預(yù)處理快速增長;流動相污染,更換新流動相今年,盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用穩步前行,隔夜的流動相再次使用時要過濾結構不合理;盡可能使用HPLC級試劑動手能力;流路中有小的氣泡,打開Purge閥意見征詢,加大流速排除提升。
  3 結(jié)語
  以上內(nèi)容只是對液相色譜中出現(xiàn)的常見的問題進行了分析,在故障排除時要遵守以下原則:一次只改變一個因素的必然要求,確定假定因素與問題之間的研究成果;如果通過更換組件來排查故障時要注意將拆下的完好組件裝回原位,避免浪費完善好;這是成功進行故障排除的關(guān)鍵大面積。總之問題分析,在使用液相色譜時一定要注意樣品的前處理與儀器的正確操作和保養(yǎng)培養。
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